Post by jone447 on Aug 2, 2023 1:55:13 GMT -5
前新鲜溶解。对于体内 PAR-CLIP 小鼠，在 12.5 小时的时间内每 2.5 小时腹膜内注射 780 mg/kg 4-硫尿苷 (4SU)。最后一次注射后2.5小时处死小鼠，通过手术切除感兴趣的器官或组织，并在液氮中快速冷冻。将组织在液氮中研磨成细粉，并在定制的液氮冷垫上用0.300 J × cm -2的365 nm紫外光照射四次，在照射之
间混合粉末。中试规模的 viP-CLIP（图 1）使亚洲手机号码列表用 1 mL NP40 裂解液（50 mM HEPES-K，pH 7.5，150 mM KCl，2 mM EDTA。1 mM NaF，0.2% (v/v) NP40，0.5 mM DTT）中裂解的约 250 mg , cOmplete TM不含 EDTA 的蛋白酶抑制剂混合物、PhosSTOP 磷酸酶抑制剂混合物）。肝脏的大规模 viP-CLIP（图 2）是在 10 mL NP40 裂解液（、完整TM不含 EDTA 的蛋白酶
抑制剂混合物、PhosSTOP 磷酸酶抑制剂混合物）。将裂解物在玻璃搅拌器中在冰上匀浆 10 次，以“低”30 秒开/关超声处理 5 个循环，通过在 4°C 下以 13,000 g 离心 20 分钟进行澄清，并通过 0.45 μm 膜过滤器过滤。 在 4SU 注射 Ad-Tial1 之前 6 天，将来自小鼠肝脏的带有 Myc 标签的 Tial1 用与每 ml 组织裂解液 250